玩具微生物挑戰性試驗能夠檢測玩具表面和內部的微生物污染情況，確保玩具在使用過程中不會對兒童健康造成威脅。通過模擬真實使用環境，評估玩具在特定條件下的微生物生長情況，可以有效預防因玩具污染導致的疾病傳播?。

　　玩具微生物挑戰性試驗方法步驟

　　（1）?試驗準備?：

　　?試驗材料?：需要準備恒溫培養箱、顯微鏡、滅菌平皿（直徑為9cm）、pH計、高壓滅菌鍋、酒精燈、錐形燒瓶、量筒、滅菌刻度吸管（10ml、2ml、1ml）、試管等儀器?。

　　?培養基和試劑?：生理鹽水、SCDLP液體培養基、卵磷脂、吐溫80-營養培養基等?。

　　（2）?微生物準備?：

　　?菌種選擇?：選擇適當的微生物進行挑戰試驗，通常選擇雜菌，可以從污染產品中提取菌種?。

　　?菌種培養?：將各菌種接種于合適的培養基中，于37℃培養箱中培養48小時，挑選典型的菌落于滅菌的液體培養基中，制成一定濃度的細菌和霉菌混合懸液，置于冰箱冷藏備用?。

　　（3）?試驗過程?：

　　?樣品準備?：稱取玩具樣品，加入滅菌的容器內，加入混合細菌懸液，充分混勻。每克樣品含細菌量為5×10^6CFU/克或CFU/ml?。

　　?培養條件?：將樣品置于28℃下培養，定期抽樣檢測其中殘存的微生物，并根據微生物的數量變化情況評價樣品的抗菌效果?。

　　?取樣分析?：在接菌的0、7、14、21、28天取樣分析，準確稱取10克樣品，加入含有玻璃小球和90ml滅菌生理鹽水的錐形瓶內，充分震蕩混勻，此懸液為1:10稀釋液；然后再用生理鹽水按1:10依次稀釋，按平板傾注法計數樣品中含菌量，細菌培養37℃下48小時?。

　　（4）?判定標準?：

　　?通過標準?：第28天時，樣品中含細菌在10^2cfu/g(ml)-10^3cfu/g(ml)，該樣品有條件地通過挑戰性實驗，即當產品中蛋白質或其它動植物材料成分不是特別高，同時生產的衛生環境符合要求，包裝物不易發生二次污染時，該防腐體系可以使用?。

　　?高效標準?：從第7天起，樣品中的細菌<10cfu/g(ml)，說明該樣品的防腐體系對微生物有特強的抑殺作用，通過挑戰試驗?。

　　許多國家和地區的安全標準要求對玩具進行微生物挑戰性試驗，以確保其符合相關的衛生和安全要求。例如，歐盟的EN71-3標準和美國的ASTMF963標準都要求對玩具進行微生物測試，以驗證其安全性?。